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siRNA参照/载体(基础试剂)细胞培养/添加剂

2020/5/26 0:53:01发布164次查看
  1.概念
动物细胞培养(animal cell culture)就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞(使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶)然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。
2.动物细胞培养的简介
  1.动物细胞培养液的成分:体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,因此在使用合成培养基时,通常需加入血清、血浆等一些天然成分。
  2.动物细胞培养液的特点:液体培养基、通常含动物血清。
  3.动物细胞培养的条件:
  ①无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
  ②营养物质:无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因等)
  血清和血浆 但血清和血浆不是营养物质。
  ③温度和ph(36.5±0.5℃,7.2~7.4)
  ④气体环境(95%的空气+5%co
2的混合气体)
  其中5%co2气体是为保持培养液的ph稳定
3.基本过程
取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或用胶原蛋白酶)处理(消化),形成分散的单个细胞,将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,成为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外,原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大以后,科学家接着进行传代培养,即将原代培养细胞分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法,从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。当培养超过50代时,大多数的细胞已经衰老死亡,但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性,即癌变。此时的细胞被称为细胞系。
4.动物细胞培养的技术应用
1.生物制品的生产(如制备单克隆抗体)
2.转基因动物的培养
3.检测有毒物质并判断其强弱
4.医学研究(生理 病理 药理)
5.器官移植培养
6.筛选抗癌药物
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